最新国产V亚洲V欧美V专区,国产亚洲欧美一区二区,天堂香港黄色网站,亚洲影院天堂中文AV色,精品操操操操操操,成人三级片无码

您好,歡迎進(jìn)入上海莼試生物技術(shù)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)熱線:13585831301
上海莼試生物技術(shù)有限公司
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法

淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法

瀏覽次數(shù):70發(fā)布日期:2024-11-01

淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
4、細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力評(píng)估:在進(jìn)行細(xì)胞傳代、復(fù)蘇或凍存前,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力評(píng)估是至關(guān)重要的步驟。①取少量細(xì)胞懸液,與等體積的0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液混合,靜置2-3分鐘。②使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞(未被臺(tái)盼藍(lán)染色的細(xì)胞)與死細(xì)胞(被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色的細(xì)胞)。③計(jì)算細(xì)胞總數(shù)及活力百分比(活細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%)。確保細(xì)胞活力高于90%方可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

5、培養(yǎng)環(huán)境優(yōu)化:淋巴成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)還需注意培養(yǎng)環(huán)境的細(xì)節(jié)優(yōu)化。①維持培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度恒定在37℃,濕度飽和,并通入5% CO?以保持適宜的pH值。②定期更換培養(yǎng)基,一般為每2-3天一次,以去除代謝產(chǎn)物,補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。③使用經(jīng)過滅菌處理的器材和試劑,減少污染風(fēng)險(xiǎn)。通過這些措施,可以進(jìn)一步提升細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),促進(jìn)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。


Contact Us
  • 聯(lián)系QQ:3004972506
  • 聯(lián)系郵箱:sdfskdfhs3004972506@qq.com
  • 傳真:86-021-60443211
  • 聯(lián)系地址:上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661

掃一掃  微信咨詢

©2024 上海莼試生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有  備案號(hào):滬ICP備17029297號(hào)-3  技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    GoogleSitemap    總訪問量:101805 管理登陸

衡水市| 长岛县| 灵宝市| 云梦县| 阳江市| 巴里| 淄博市| 嘉峪关市| 博野县| 大新县| 宁武县| 英吉沙县| 贵溪市| 朝阳区| 北安市| 昭苏县| 娄底市| 临洮县| 墨竹工卡县| 汝州市| 镇远县| 舞钢市| 中江县| 山东省| 大宁县| 聂荣县| 绥芬河市| 昌江| 承德县| 新民市| 临高县| 东阳市| 平度市| 磐安县| 习水县| 彭山县| 景德镇市| 绥宁县| 旬阳县| 绥棱县| 大埔区|