產(chǎn)品名稱 | 自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Amycolata autotrophica |
貨號 | CP933888 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:
多粘菌素E磺酸鈉標準品小鼠對氨基苯酸(PABA)ELISA Kit,48T/96T
共聚維酮標準品人對氧酶(PON)ELISA Kit,48T/96T
玉米油標準品人反三碘狀腺原氨酸(rT3)ELISA Kit,48T/96T
促腎上腺皮質(zhì)激素標準品人抗心脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA Kit,48T/96T
醋酸可的松標準品小鼠抗心脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA Kit,48T/96T
棉籽油標準品大鼠抗心脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA Kit,48T/96T
肌酸酐標準品人抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA Kit,48T/96T
色甘酸鈉標準品小鼠抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA Kit,48T/96T
色甘酸鈉相關物質(zhì)A標準品大鼠抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA Kit,48T/96T
交聯(lián)聚維酮對照品標準品人抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit,48T/96T
克羅米通標準品小鼠抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit,48T/96T
異苯標準品大鼠抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit,48T/96T
姜黃素標準品牛的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA Kit,48T/96T
類姜黃素標準品人的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA Kit,48T/96T
化花青素標準品小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA Kit,48T/96T Gibberellins 抗赤霉素抗體芫花素(暫行)
GHRF/GHRH 生長激素釋放激素抗體橙黃決明素(暫行)
Ghrelin/Obestatin 腦腸肽抗體山麥冬皂苷B
Ghrelin 28 腦腸肽抗體短亭山麥冬皂苷C
GHR 生長激素受體抗體魯斯可皂苷
GHDC GHDC蛋白抗體木通苯醇苷B
GH/Growth Hormone 生長激素抗體荷苞花苷
GGT6 γ-谷氨酰轉肽酶6抗體通關藤苷H
GGT1/CD224 γ谷氨酰轉移酶抗體4-羥基苯酸
GGPS1 法尼基二酸合酶1抗體女貞苷
GGCX γ-谷氨酰羧化酶抗體瓜子金皂苷己
GFRAL 膠質(zhì)細胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1樣蛋白抗體酰哈巴苷
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒GFRA4 GDNF家族受體α-4抗體醋酸羥孕酮
GFR Alpha-1 GDNF家族受體α-1抗體安乃近
GFP 綠色熒光蛋白抗體(+)2-氨基醇
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
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