注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 結(jié)腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Campylobacter colic |
貨號 | CP934012 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
結(jié)腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應(yīng)時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應(yīng)用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:
四酚醇標(biāo)準(zhǔn)品雞白痢抗體檢測(PD)ELISA Kit,48T/96T
L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)ELISA Kit,48T/96T
輔酶 Q10標(biāo)準(zhǔn)品人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA Kit,48T/96T
輔酶 Q10環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)品小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA Kit,48T/96T
輔酶 Q10雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品人可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA Kit,48T/96T
10-十一烯酸標(biāo)準(zhǔn)品小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA Kit,48T/96T
結(jié)腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品大鼠煙堿型酰膽堿受體(N-AChR)ELISA Kit,48T/96T
阿糖尿苷標(biāo)準(zhǔn)品大鼠蕈堿型酰膽堿受體(M-AChR)ELISA Kit,48T/96T
烏拉莫司汀標(biāo)準(zhǔn)品犬2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA Kit,48T/96T
尿酸標(biāo)準(zhǔn)品人2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA Kit,48T/96T
尿酸C13標(biāo)準(zhǔn)品人食欲素受體(OXR)ELISA Kit,48T/96T
熊去氧膽酸標(biāo)準(zhǔn)品豬食欲素受體(OXR)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸萬乃洛韋標(biāo)準(zhǔn)品人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA Kit,48T/96T
萬乃洛韋相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA Kit,48T/96T
萬乃洛韋相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品牛酰酸檢測(ACAC)ELISA Kit,48T/96T CCDC70 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體鹽酸去氧腎上腺素
CCDC7 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體鹽酸去羥嗪
CCDC69 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體鹽酸肼屈嗪
CCDC68/se57-1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白68抗體(皮膚T淋巴細胞淋巴瘤相關(guān)抗原)鹽酸倍他司汀
CCDC67 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白67抗體鹽酸羥嗪
CCDC65 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白65抗體貝斯素
CCDC63 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白63抗體β-欖香烯
CCDC61 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白61抗體格列齊特
CCDC60 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白60抗體尼莫地平
CCDC6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體(乳頭狀狀腺癌編碼蛋白)蒿醚
CCDC58 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白58抗體金諾芬
CCDC56 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白56抗體鹽酸卡特羅
CCDC54/NYD-SP17 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54抗體氨魯米特
CCDC52 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體大豆油
CCDC51 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體對羥基苯酸酯
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