?ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值i大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
人熱休克蛋白90kDaβ英文名稱:member 1(HSP90B1 ELISA kit產(chǎn)品別名:人HSP90B1 elisa試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
產(chǎn)品名稱:人熱休克蛋白90kDaβELISA試劑盒
英文名稱: member 1(HSP90B1 ELISA kit
規(guī)格 :48T/96T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..
標本的采集與保存:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 小時或4oC 過夜,然后1000×g 離心20 分鐘,取上清即
可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘,
取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進行充分研磨,該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。
4、其它生物標本:請1000×g 離心20 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān),我司嚴格按照進行生產(chǎn),已獲得國家承認的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用加入到標本稀釋液中使RF降解;
補體的控制方法:
①用EDTA稀釋標本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等;
控制方法:采血時規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標本時采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標本;對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
公司采用全是進口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強,無效包退包換,公司提供免費代測服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。
以下是人熱休克蛋白90kDaβELISA試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
組織酸二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒SDH(Human sorbitol dehydrogenase) ELISA Kit 人山梨醇脫酶
血液酸二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒PPI(Human Peptidyl prolyl cis/trans isomerase) ELISA Kit 人肽基脯酰順反異構(gòu)酶
細胞酸二酯酶2(PDE2)活性熒光定量檢測試盒OCT(Human ornithine carbamoyl transferase) ELISA Kit 人鳥酸基酰轉(zhuǎn)移酶
組織酸二酯酶2(PDE2)活性熒光定量檢測試盒vaspin(Human Visceral adipose-specific serine protease inhibitor) ELISA Kit 人內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制
血液酸二酯酶2(PDE2)活性熒光定量檢測試盒PP(Human Protein Phosphatase) ELISA Kit 人蛋白酸酶
細胞酸二酯酶3(PDE3)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒TrxR(Human thioredoxin reductase) ELISA Kit 人硫氧還蛋白還原酶
組織酸二酯酶3(PDE3)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒HLE(Human leukocyte exastase) ELISA Kit 人白細胞彈性蛋白酶
血液酸二酯酶3(PDE3)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒Human Elastase ELISA Kit 人彈性蛋白酶
細胞酸二酯酶3(PDE3)活性熒光定量檢測試盒AMS/AMY(Human Alpha-Amylase) ELISA Kit 人α淀粉酶
組織酸二酯酶3(PDE3)活性熒光定量檢測試盒ALP(Human alkaline phosphatase) ELISA Kit 人性酸酶
血液酸二酯酶3(PDE3)活性熒光定量檢測試盒AZU(Human azurocidin) ELISA Kit 人天青殺素
細胞酸二酯酶4(PDE4)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒ATA(Human Angiotensinase A) ELISA Kit 人血管緊張肽酶A
組織酸二酯酶4(PDE4)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒PAMY(Human Pancreatic Amylase) ELISA Kit 人胰淀粉酶
血液酸二酯酶4(PDE4)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試盒AlphaENOL(Human Alpha-enolase) ELISA Kit 人α烯醇化酶
人熱休克蛋白90kDaβELISA試劑盒細胞酸二酯酶4(PDE4)活性熒光定量檢測試盒Human Collagenase Type II ELISA Kit 人膠原酶IICanine IL-12/P70(Interleukin 12(P70)) ELISA Kit
Canine IL-12/P70(Interleukin 12(P70)) ELISA KitZNF354C英文名稱:TAS1R3半胱蛋白酶8相關(guān)蛋白2體
化學(xué),合成試, 2-噁
SHC英文名稱:TLR5半乳糖凝集素3抗體
ZNF312英文名稱:TERT叉蛋白F1體
化學(xué),合成試, 四鋁鉀
phospho-SHC (Ser36)英文名稱:TMUB1生長因子受體結(jié)合蛋白7抗體
ZNF268英文名稱:TOP2A高嗜性粒細胞綜合癥相關(guān)蛋白FIP1L1體 英文名稱:Biotin/BSA丸發(fā)育相關(guān)蛋白體
化學(xué),固相合成, 2,6-二-3-
phospho-SHC (Tyr349)英文名稱:Phospho-TCTP(Ser46)糖基轉(zhuǎn)移酶1結(jié)構(gòu)域1抗體
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