?ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值i大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
人非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原211ELISA試劑盒英文名稱:CA211 ELISA kit產(chǎn)品別名:人CA211 elisa試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
產(chǎn)品名稱:人非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原211ELISA試劑盒
英文名稱: CA211 ELISA kit
規(guī)格 :48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
標(biāo)本的采集與保存:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC 過夜,然后1000×g 離心20 分鐘,取上清即
可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘,
取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。
4、其它生物標(biāo)本:請1000×g 離心20 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過長或凝固不全等;
控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過久,檢測時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
公司采用全是進(jìn)口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強(qiáng),無效包退包換,公司提供免費(fèi)代測服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。
以下是人非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原211ELISA試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
4,6-二喹啉TGF-β誘導(dǎo)早期基因1試盒
4,7-二喹啉Tau蛋白elisa試盒
4,7-二羥基喹啉TAR DNA結(jié)合蛋白43試盒
4,7-二喹啉s腺苷同型半胱酸試盒
4,8-二喹啉Syndecan-3/試盒
4,8-二羥基喹啉Syndecan-1/CD138試盒
2-酰胺基-5-基啶SWI/SNF相關(guān), 基質(zhì)關(guān)聯(lián),肌動(dòng)蛋白依染色質(zhì)調(diào)控因子,亞家族c,成員1試盒
3,4,5,6-四-2-基啶STEAP家族成員4試盒
3,4,5-三啶-2-酸STEAP家族成員1試盒
3,4,5-三-2-三基啶Stathmin 1試盒
3,4,5-三-6-羥基啶-2-羧酸STAT3蛋白抑制分子試盒
3,5,6-三啶-2-酸Spondin-2 elisa試盒
3,6-二氟啶-2-酸SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2試盒
人非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原211ELISA試劑盒3,6-二氟啶-2-氰基SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1試盒
3,6-二2-啶酰胺SMAD3 elisa試盒Human MAP2K5(Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 5) ELISA Kit
Human MAP2K5(Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 5) ELISA KitCNKSR1 Ras激酶抑制因子連接增強(qiáng)蛋白1抗體
CNKSR2 Ras激酶抑制因子連接增強(qiáng)蛋白2抗體
CNKSR3 Ras激酶抑制因子連接增強(qiáng)蛋白3抗體
beta-Amyloid(1-16) (human) β淀粉樣肽(1-16)抗體(人)
beta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽(1-16)抗體
β淀粉樣肽(25-35)抗體
β淀粉樣肽(31-35)抗體
β淀粉樣肽1-42 (C端抗體)
β淀粉樣肽β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 C端抗體
β分泌酶抗體
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