培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產(chǎn)品名稱 | NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞 |
規(guī)格 | 5×105/瓶 |
貨號 | CS-X3241 |
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,還是復蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關產(chǎn)品:
37.5pg/ml豬圓環(huán)病2型(PCV-2)核檢測試盒(PCR法)JKC-302
0.938ng/ml豬細小病(PPV)核檢測試盒(PCR法)C(GNWHGTAPD)-WVYFAHLNIIW
0.938ng/ml非洲豬瘟(ASFV)核檢測試盒(PCR法)Dynorphin A (1-9)
0.469ng/ml豬肺炎支原體(MHP)核檢測試盒(PCR法)N-Me-Tyr1,N-Me-Arg7,D-Leu-NHEt8)-Dynorphin A (1-8)
37.5pg/ml口蹄疫病通用型(FMDV-U)核檢測試盒(RT-PCR法)Dynorphin A (1-8)
9.375pg/ml口蹄疫病亞洲1型(FMDV-Asia1)核檢測試盒(RT-PCR法)(Phe7)-Dynorphin A (1-7) amide
9.375pg/ml口蹄疫病O型(FMDV-O)核檢測試盒(RT-PCR法)(Phe7)-Dynorphin A (1-7)
9.375pg/ml口蹄疫病A 型(FMDV-A)核檢測試盒(RT-PCR 法)Dynorphin A (1-7)
9.375pg/ml豬藍耳病病通用型(PRRSV-U)核檢測試盒(RT-PCR法)Dynorphin A (1-6)
18.75pg/ml高致病性豬藍耳病病(PRRSV-M)核檢測試盒(RT-PCR法)Dynorphin A
NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA試盒酰胺培養(yǎng)基
人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA試盒膠培養(yǎng)基(營養(yǎng)膠)
人小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試盒膠培養(yǎng)基(營養(yǎng)膠)
人小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試盒L-酪氨營養(yǎng)瓊脂配套試
人小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試盒L-酪氨營養(yǎng)瓊脂基礎
人小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試盒Additives Tyrosine Agar
人神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試盒Tyrosine Agar Base
人神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試盒甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂平板(MYP)
人神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試盒平板
人神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試盒甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎MYP
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