細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等; 適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。
人胃癌組織源成纖維細(xì)胞提取物是從人胃癌組織源成纖維細(xì)胞提取的,人胃癌組織源成纖維細(xì)胞從人胃癌組織制備。人胃癌組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人胃癌組織源成纖維組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
產(chǎn)品名稱 | 人胃癌組織源成纖維細(xì)胞提取物 |
英文名稱 | Human Cancer: Stomach Cancer Fibroblast Derivatives |
貨號 | CS-X3632 |
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
0.188ng/mlα2-巨球蛋白(α2M)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-mTyr
0.469ng/mlβ-乳球蛋白(βLg)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-PSA-hPSA
46.9pg/ml白蛋白(ALB)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rEF1
0.094ng/ml白蛋白(ALB)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rEF1/RU5'
0.234ng/ml白蛋白(ALB)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rElastase
0.188ng/ml甘肽(GAL)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rGFAP
0.094ng/ml甘肽(GAL)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rGRP78
18.75pg/ml甘肽(GAL)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rGRP94
18.75pg/ml低密度脂蛋白(LDL)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-rNSE-RU5'
0.188ng/ml抗利尿激素(ADH)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-SV40-bAlb
人胃癌組織源成纖維細(xì)胞提取物胰島素降解酶(IDE)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4-2-吡啶偶間苯二酚單鈉鹽
ⅩⅤ型膠原(COL15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)副品紅(>85%,BS)
絲織蛋白1(DBN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鈣激活鉀通道阻斷來源于覃青霉
墨蝶呤還原酶(SPR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1,4-二烯?;?>97%,BR)
序列相似家族135成員B(FAM135B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)青霉(>98% (HPLC),BC)
甘油醛-3-脫酶(GAPDH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)青霉震顫素(>95%(HPLC),BC)
分泌粒蛋白Ⅴ(SCG5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)β-D-半乳糖五酯(>98%,BR)
煙型膽受體α5(CHRNα5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)烯醇單環(huán)己銨鹽(>98%,BC)
生長分化因子2(GDF2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人造沸石
含卷曲螺旋C2域蛋白1A(CC2D1A)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯酚磺33%溶液
鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酚肽二四鈉(>96%,BC)
斯鈣素1(STC1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)吩噻嗪(>98%,BR)
絲蛋白結(jié)合LIM蛋白1(FBLIM1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯氧鈉(>98%,BR)
L-型電壓依性鈣離子通道α1D亞基(CACNα1D)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)水楊苯酯(>98%,BR)
白介素1β(IL1β)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)脂酶A2
細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進(jìn)口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
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