細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進(jìn)口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
大鼠成骨細(xì)胞提取物是從大鼠原代成骨細(xì)胞提取的,大鼠原代成骨細(xì)胞從正常大鼠成骨組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠成骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠成骨細(xì)胞提取物 |
英文名稱 | Rat Bone: Normal Osteoblast Derivatives |
貨號 | CS-X3738 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
1.875ng/mlDNase/RNase-Free Water(DEPC處理水) 降價GTP Solution, Tris buffered
37.5pg/mlDNase/RNase-Free Water(DEPC處理水) 降價UTP Solution, Tris buffered
0.094ng/mlRNAwait(非凍型組織RNA保存液)NTP Set, Tris buffered
0.094ng/mlRNAwait(非凍型組織RNA保存液)Resuspension Solution for GeneJET Plasmid Maxiprep Kit (K0491/K0492)
0.938pg/mlRNAwait(非凍型組織RNA保存液)Neutralization Solution for GeneJET Plasmid Maxiprep Kit (K0491/K0492)
18.75pg/ml固相RNase清除Endotoxin Binding Reagent for GeneJET Plasmid Maxiprep Kit (K0491/K0492)
9.375pg/ml固相RNase清除Wash Solution I (concentrated) for GeneJET Plasmid Maxiprep Kit (K0491/K0492)
0.188ng/ml液相RNase清除Wash Solution II (concentrated) for GeneJET Plasmid Maxiprep Kit (K0491/K0492)
37.5pg/mlRNAsaver(RNA長效保存液)Elution buffer for GeneJET Plasmid Midiprep Kit
0.375ng/mlEB染色液 化錠 紅色熒光核染料 GoldView gelred (10000X)Plant RNA Lysis Solution for GeneJET Plant RNA Purification Mini Kit (K0801/K0802)
大鼠成骨細(xì)胞提取物赤(GA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)α-聯(lián)呋喃酰二肟(>97.0%(W))
前列腺素I合酶(PTGIS)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)5-二氨基-2-亞硝基苯酚鹽鹽(>98.0%(HPLC)(T))
蕈型膽受體M1(CHRM1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯基-2-吡啶基肟(>98.0%(T))
煙型膽受體α1(CHRNα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)焦棓酚紅
10kDa熱休克蛋白1(HSP10)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)3-(2-吡啶基)-5,6-雙(4-磺苯基)-1,2,4-三嗪二鈉鹽水合物(>98.0%(HPLC))
肝膠原凝集素1(CLL1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2-鄰羥亞芐基氨基苯酚(>95.0%(T))
肌營養(yǎng)不良蛋白(DMD)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鋅試
親環(huán)素A(CYPA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1,2-雙(二膦基)(>95.0%(GC))
Endoglin蛋白(ENG)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)內(nèi)消旋-2,3-二巰基二(>98.0%(T))
細(xì)胞絨毛蛋白(CVL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)N-(2,6-二基苯基氨基?;?亞氨基二(>98.0%(HPLC)(T))
通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡE肽1(GTF2E1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)N-(2,6-二苯基氨基?;?亞氨基二(>99.0%(HPLC)(T))
殺傷細(xì)胞凝集素樣受體亞家族C成員2(KLRC2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1-羥基亞基-1,1-二膦(約60%水溶液,約4.2mol/L)
煙型膽受體β2(CHRNβ2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)亞基二膦(>95.0%(T))
白介素1受體關(guān)聯(lián)激酶1(IRAK1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)吡哆醛-L-谷氨二鉀鹽[藥物研究配體]
白介素1受體關(guān)聯(lián)激酶2(IRAK2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)吡哆醛-L-亮氨鉀鹽[藥物研究配體]
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