細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學科領(lǐng)域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等; 適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學性狀相似的實驗對象。
人腎系膜組織主要功能有:(1)組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分。(2)在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受損后影響系膜細胞和上皮細胞,進而影響腎臟病變。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎系膜組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人腎系膜組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產(chǎn)品名稱 | 人腎系膜組織提取物 |
英文名稱 | Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives |
貨號 | CS-X3844 |
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
46.875pg/ml5-Hydroxy-1,4-naphthalenedione;胡桃醌 鈉離子通道蛋白抗體ELISA試盒
9.375pg/ml5-Hydroxy-2-Methyl-1,4-Naphthoquinone;白花丹醌/蘭雪醌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29檢測試盒
0.188ng/mlCepharanthine;千金藤素內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素檢測試盒
0.094ng/mlTangeretin;桔皮素內(nèi)臟脂肪特性絲氨蛋白酶抑制檢測試盒
18.75pg/mlAloeemodin;蘆薈大黃素內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素檢測試盒
0.094ng/mlChrysophanol;大黃酚內(nèi)源性分泌型糖基化終產(chǎn)物受體檢測試盒
0.094ng/mlHyperoside;金絲桃苷內(nèi)皮脂肪酶檢測試盒
46.875pg/mlKaempferitrin;苷內(nèi)皮抑素檢測試盒
18.75pg/mlImperatorin;歐前胡素內(nèi)皮型一氧化合成酶檢測試盒
0.188ng/mlIsoimperatorin;歐前胡素內(nèi)皮細胞特分子-1檢測試盒
人腎系膜組織提取物反三碘狀腺原氨(rT3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)阿格列汀;阿洛利停
粘蛋白5AC(MUC5AC)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)莪術(shù)烯醇(標準品)
凝因子Ⅷ(F8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BYL719
葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BYL719
蛋白激酶Cζ(PKCζ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)A66,p110α抑制
蛋白酪氨酶受體O(PTPRO)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)SC-514;IKK-2抑制
線粒體醛脫酶(ALDM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4-庚
性酶1(ACP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)γ-環(huán)糊精
性酶1(ACP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)基倍他環(huán)糊精,2,6-二基-β-環(huán)糊精
角蛋白8(KRT8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)埃博B;帕土匹龍
生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BMS-345541
白介素8(IL8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)IKK-16,選擇性IKK抑制
生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)曲格列汀琥珀鹽
生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2-[2-(2-t-Boc-氨基氧基)氧基]醇
金屬蛋白3(MT3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,8-二基-2,3,4,4a,5,9b-六-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚二鹽鹽
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。
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